多肽固相合成（SPPS）和長肽合成的混合技術(shù)

多肽固相合成是當(dāng)今 流行的多肽合成方法。C端的前面一個(gè)氨基酸被耦合在活化的載體（如聚苯乙烯）上。樹脂既可作為c端保護(hù)基，同時(shí)又可將增長的肽產(chǎn)品從在合成過程中形成的反應(yīng)混合物中快速分離出來。

我們經(jīng)常有客戶對(duì)超長多肽的合成咨詢，比如長度在100到200個(gè)氨基酸的長肽的合成，其實(shí)200個(gè)氨基酸已經(jīng)是屬于蛋白質(zhì)的范疇了。成功合成169個(gè)氨基酸的蛋白證明我們的合成技術(shù)在現(xiàn)有的技術(shù)平臺(tái)是完全能勝任長肽的合成的，我們的技術(shù)平臺(tái)PeptideSyn通常都是合成50個(gè)氨基酸以下的多肽，但是通過我們對(duì)多肽鏈接技術(shù)的改造和針對(duì)長肽的 ，我們現(xiàn)在能成功合成蛋白質(zhì)長度的多肽。

通過化學(xué)合成的辦法獲得長達(dá)100到200個(gè)氨基酸的蛋白，比其它方法相比要跟快捷和便宜，況且化學(xué)合成的蛋白是按照氨基酸的順序來進(jìn)行的，不會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤或者變異的情況。化學(xué)合成還能加入一些別的辦法不能進(jìn)行的修飾，比如取代常規(guī)氨基酸為D型氨基酸，增加某個(gè)位點(diǎn)的磷酸化或者甲基化。化學(xué)合成還不需要額外增加純化蛋白用的標(biāo)簽比如6HIS或者FLAG等。在蛋白表達(dá)的方法上，反而是基因合成，質(zhì)粒構(gòu)建，蛋白表達(dá)和純化等工作占據(jù)了絕大多數(shù)的時(shí)間和成本。因此長肽的化學(xué)合成方法是廣大科研工作值得嘗試的途徑。

固相合成和混合技術(shù)策略

優(yōu)勢

• 長肽被快速合成：Fmoc/Boc法
• 生產(chǎn)周期短
• 工藝自動(dòng)化和高效性
• 沒有需分離的中間體

• 原料成本高，易造成原料浪費(fèi)。
• 雜質(zhì)較復(fù)雜：包括有插入、截?cái)唷h除、被修改或未被修改的氨基酸。

成功案例 1

成功的在四周內(nèi)合成了一個(gè)169個(gè)氨基酸的多肽 (M.W. 18716.41, 83% purity)。多肽合成的成功率取決于多肽的序列，有時(shí)候150個(gè)氨基酸的多肽有時(shí)候比一個(gè)70個(gè)氨基酸的多肽更容易合成。通常利用Boc/Bzl進(jìn)行氨基酸的保護(hù)對(duì)于長的多肽會(huì)比較有幫助，由于多肽產(chǎn)品的切割需要比較強(qiáng)的酸比如TFMSA和HF，所以在去保護(hù)的時(shí)候有些有活性的中間產(chǎn)物很容易和一些氨基酸進(jìn)行反應(yīng)，我們對(duì)原料和酸堿的選擇能很大程度的解決這些問題，因此我們的PeptideSyn技術(shù)平臺(tái)對(duì)于長肽的合成起到了突破性的作用。

HPLC Results

Mass Spectrometry Results

成功案例 2

某客戶要求合成一高度疏水的含68個(gè)氨基酸的多肽(純度為85%)，N端進(jìn)行FITC標(biāo)記。此多肽在4周內(nèi)成功合成。

HPLC Results

Mass Spectrometry Results