生物素標(biāo)記多肽

在許多蛋白研究領(lǐng)域中，生物素標(biāo)記肽通常與親和素結(jié)合而被檢測(cè)或純化: 免疫印跡（WB）、ELISA、免疫沉淀 (IP)、

多肽親和純化、免疫組化 (IHC)、細(xì)胞表面標(biāo)記、流式細(xì)胞術(shù)/熒光激活細(xì)胞分類(FACS)。

合生生物提供生物素標(biāo)記肽合成服務(wù)。通常，生物素可被標(biāo)記在N端或C端(經(jīng)由Lys)。我們推薦N端標(biāo)記，其標(biāo)記的成

功率更高，所需時(shí)間更短，操作更簡(jiǎn)潔。

生物素可通過(guò)各種不同的linker或spacers與多肽隔離。一般建議引入間隔器如Ahx（一個(gè)6碳鏈接器)讓生物素更穩(wěn)定

或更靈活。

合生生物提供N端或C端生物素標(biāo)記：Biotin (N terminus), Lys(Biotin)(middle), Lys(Biotin)(C terminus)。

帶有linker(Ahx)的生物素化: Biotin-Ahx (N terminus), Lys(Ahx-Biotin)(middle), Lys(Ahx-Biotin)(C terminus)。

生物素標(biāo)記肽的Pull-down實(shí)驗(yàn)方案分析

生物素標(biāo)記肽可與親和素磁珠共軛以生成樹(shù)脂，用于肽pulldown試驗(yàn)。先把生物素標(biāo)記肽上樣至Immobilized 

streptavidin beads (Pierce) 錨定有親和素的磁珠上，再與細(xì)胞裂解液孵育。細(xì)胞裂解于1％（v/v）Nonidet P-40, 

150 mM sodium chloride, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, protease inhibitors (Complete Tablets, Roche Applied

 Science), 加入 1 mM sodium orthovanadate作為磷酸酶抑制劑。等量的蛋白質(zhì)分別與被錨定的多肽在4℃孵育6

小時(shí)。經(jīng)過(guò)大量洗滌，在SDS樣品buffer中煮沸，結(jié)合蛋白可從被錨定的多肽洗脫下來(lái)，或者，用50 mM 

dithiothreitol將多肽與蛋白復(fù)合物從磁珠中斷開(kāi)。將來(lái)自活性肽和對(duì)照目標(biāo)肽pull-downs的洗脫液合并，以作進(jìn)一

步的分析。

上圖為鏈霉親和素-生物素鍵力測(cè)量示意圖。由于它們異常高的親和結(jié)合性，其中*突出的配體-受體對(duì)是鏈霉

親和素-生物素（streptavidin-biotin）和親和素-生物素（avidin-biotin）。 這兩種蛋白質(zhì)都有一個(gè)四聚體的結(jié)構(gòu)，

這樣他們可以結(jié)合4個(gè)配體。

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